本文将探讨如何使用 Cyto-Mine® 它们可用于通过使用均质、微型、无动物来源 (AOF) IgG 分泌测定来量化和检测最大的抗体产生克隆，逐个细胞地分析大量异质细胞。
Bioprocess Cell Line Development 的主要目标是在数周而不是数月内实现高产量的定义明确、生长旺盛的克隆细胞系。
然而，这一过程的一个主要障碍是筛选和分离具有理想特性的稀有细胞。
传统上，这是使用有限稀释的资源密集型技术实现的，最近使用半自动化技术支持这种技术，包括菌落挑选、细胞分选和孔内细胞成像。
这 细胞地雷® 单细胞分析及单克隆保证体系 它们通过筛选数十万个单个细胞的分泌靶蛋白来帮助解决当前技术的挑战。
接下来是将最大的高活力生产商隔离并分配到微孔板孔中，如图 1 所示。
图1。 细胞地雷® 专有技术可检测并从复杂细胞群中分离出高产克隆。 图片来源：Sphere Fluidics
本文描述的研究描述了 Cyto-Mine 的制作过程® IgG 分泌测试测量封装在高度一致的皮升“试管”中的数十万个单细胞的生产率。
方法
细胞地雷® 工作流程
细胞地雷® 它遵循稀释减少和吞吐量检查过程，但以更有效的方式、更高的生产率和完全自动化的方式进行。
使用泊松分布统计，细胞被封装在 300 个首选培养基的皮滴中，稀释水平优化了仅包含一个细胞的皮滴数量。
接下来，孵育细胞以允许分泌的目标蛋白聚集在皮滴内，使用放置在培养基中的 AOF IgG 检测试剂捕获和确定。 微型意味着仅需 0.5 至 2 小时即可测量分泌的 IgG。
因此，该组中分泌较高的单细胞被分选出来。 图 2 提供了 Cyto-Mine 整合阶段的总结® 实际的。
图 2。 细胞地雷® 工作流程。 使用完全集成的微流体过程集成单细胞筛选、分选、分离和验证。 图片来源：Sphere Fluidics
细胞地雷® IgG 分泌测定
Cyto-Mine 的关键支持成分® 是它测量每个单细胞特异性 IgG 产生率的能力。
起始细胞试剂盒无需预先修改，只需与首选的 AOF 检测试剂混合即可，然后加载到 Cyto-Mine 上®.
细胞分泌的 IgG 在皮二倍体中积累 现场 孵化阶段
检测传感器与 IgG 种类，这会引起 FRET 介导的荧光偏移，如图 3 所示。接下来，Cyto-Mine® 它测量产生的荧光信号并将其转换为定量输出。
图 3。 细胞地雷® 基于皮滴的 IgG 分泌测定。 一对定制的 IgG 特异性 AOF 荧光探针被捕获在每个皮多极内。 封装细胞分泌的 IgG 被检测探针对识别，形成三体 FRET 复合物，催化荧光信号。 图片来源：Sphere Fluidics
结果
IgG标准滴定曲线
验证 细胞地雷® IgG 分泌测定从培养基中产生了五个不同批次的 picodroplets，其中人 IgG 的浓度范围为 0 至 20 mg/L。
然后，将五组皮滴汇集在一起并使用 Cyto-Mine 进行分析® AOF技术。
图 4。 细胞地雷® 散点图。 大量单个皮滴上载有指定浓度的人 IgG，然后用 Cyto-Mine 解决® IgG 分泌测定和分析。 图片来源：Sphere Fluidics
图 4 显示了如何将不同的滴度分解为不同的组。
高达 20 mg/L 的 IgG 浓度代表典型的 Cyto-Mine® 工作范围，相当于高达 144 pg/细胞/天的比生产率 (Qp)，假设潜伏期为 1 小时。 图 5 显示了使用 Cyto-Mine 生成的标准校准曲线® 散点图数据。
图 5。 来自 Cyto-Mine 的标准人 IgG 滴定曲线® IgG 分泌测定和分析。 图片来源：Sphere Fluidics
筛选高产CHO细胞群
一组异质的 CHO 细胞被稳定转导以表达人 IgG。 然后将其与 Cyto-Mine 混合® 人IgG的AOF检测试剂。
将细胞封装在皮滴中，随后孵育 2 小时。 然后，使用 Cyto-Mine 对它们进行了分析® IgG 分泌测定。
结果显示具有高受体-供体荧光比和聚集门的细胞群。
右下角明亮的椭圆形簇代表大部分数据点，由含有低或非生产性细胞的皮滴和空皮滴组成。
用户可以自定义门多边形，为微孔板上具有更高聚集值的目标细胞提供额外的灵活性。
图 6。 细胞地雷® 用 Cyto-Mine 孵育的皮滴包被 CHO 细胞产生的 FRET 信号散点图® 人IgG的AOF检测试剂。 图片来源：Sphere Fluidics
结论
这些结果证明了 Cyto-Mine 的强大功能® 筛选大细胞群以识别、分类和分离高价值克隆。
所使用的测试是在通常由标准生物药物生产细胞类型产生的免疫球蛋白范围内进行定量的。
使用 Cyto-Mine® 基于 picodroplet 的 IgG 分泌测定具有以下主要优点：
- 质量：提取和分离稀有单核细胞、活细胞、高产细胞的独特能力
- 无菌性：完全无菌、一次性和 AOF 工艺
- 简单性：无缝、自动化、一步到位的流程，无需多种工具
- 效率和速度：它允许许多项目并行运行，并为用户节省其他活动的时间
- 可追溯性：提供可存储的图像，在消除单克隆所需的文件证据时证明单个细胞的状态。
- 小型化：促进高通量 pL 分选，同时使用最少的分析试剂
感谢和赞赏
由 Sphere Fluidics 最初创作的材料制作而成。 本文详述的工作部分由英国政府的先进制造供应链计划 (AMSCI) 资助，作为 BioStreamline 项目的一部分，旨在开发新方法以更有效地开发和制造下一代生物制药。
关于射流
我们的愿景
我们的理念很简单。 我们结合我们的知识和资源，帮助您找到稀有且有价值的生物变异体，同时帮助您节省时间、降低成本并在竞争中保持领先地位。
我们新的单细胞分析系统提供单细胞的快速筛选和表征。 这些系统支持获得专利的 picodroplet 技术，该技术专门用于增加您发现罕见的“十亿分之一”分子或细胞的机会，这些分子或细胞可能会引起行业轰动。
我们明白时间至关重要。 这就是为什么我们的技术可以提高一系列应用的通量和检测灵敏度。 最重要的是，我们灵活的系统会随着您不断变化的研究需求而发展，提供一个适应性强的平台来帮助您实现目标。
我们的历史
成立于2010年， 现场流体 是一家历史悠久的生命科学公司，最初是从剑桥大学分离出来的。 我们最初开发了 25 种专利产品——生物芯片和特种化学品——现在正在帮助全球数百名客户进行研究。
我们最初专注于生产新的生物芯片系统并提供研发服务。 从那时起，我们扩展了我们的专业知识，并正在开发一个技术平台，通过单细胞分析在一系列不断增长的市场中实现发现。 我们的系统使新生物制药的开发更快、更具成本效益，并提高了单克隆抗体筛选、细胞系开发和许多其他应用的整体研究效率，包括合成生物学、单细胞诊断、预测和单细胞基因组编辑。
细胞地雷® 单细胞分析系统是我们的旗舰产品 – 第一个完整的台式系统，可在一天内自动分析、分选和分配数百万个单个细胞。
我们的伙伴关系
我们重视并始终乐于讨论新的、成功的和创新的学术和行业合作伙伴关系，以进一步开发和改进我们的单细胞技术。
我们的技术访问计划和协作服务的存在是为了使学术研究人员和公司能够通过直接合作伙伴关系从我们的应用专业知识中受益。
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